中科院1區_中藥復方1區Top: 安徽中醫藥大學附屬醫院等團隊揭示芪藤消濁顆粒激活自噬緩解慢性腎小球腎炎

【寫在前面】：本期推薦的是由安徽中醫藥大學附屬醫院蕪湖中醫院科研部、安徽中醫藥大學附屬第一醫院藥學部、安徽醫科大學巢湖醫院藥學部等研究團隊合作近期發表于Phytomedicine(IF11.3）的一篇文章，揭示芪藤消濁顆粒激活自噬緩解慢性腎小球腎炎。

【期刊簡介】

【題目及作者信息】

Qiteng xiaozhuo granules activate mitophagy to alleviate chronic glomerulonephritis

背景

芪藤消濁顆粒（QTXZG）是一種中藥方劑，因其療效而得到廣泛認可。先前的研究表明，甲基轉移酶樣3（METTL3）/FOS樣抗原1（FOSL1）N6甲基腺苷（m6A）軸在體外和體內慢性腎小球腎炎（CGN）的自噬調節中起著至關重要的作用。然而，尚不清楚QTXZG是否通過METTL3/FOSL1 m6A軸調節有絲分裂吞噬在CGN中發揮治療作用。本研究旨在通過METTL3/FOSL1 m6A軸激活腎小球系膜細胞的有絲分裂吞噬，探討QTXZG的腎臟保護機制。

方法

分別采用腺嘌呤誘導的CGN小鼠和脂多糖刺激的小鼠腎小球系膜細胞作為體內和體外模型。采用高效液相色譜指紋圖譜、峰分配、標記物定量和分析方法驗證對QTXZG進行了化學表征和質量控制。通過血清肌酐、血尿素氮、免疫球蛋白G和免疫球蛋白M定量評估腎功能。使用蘇木精和曙紅、Masson和過碘酸希夫染色分析腎臟組織病理學。通過細胞計數kit-8試驗優化含QTXZG的血清濃度和治療時間。通過酶聯免疫吸附試驗和活性氧染色評估炎癥和氧化應激。通過比色法定量全球m6A水平，并通過甲基化RNA免疫沉淀定量PCR驗證FOSL1 mRNA m6A修飾。放線菌素D實驗測定FOSL1 mRNA的穩定性。通過蛋白質印跡、透射電子顯微鏡、MitoTracker Red染色和微管相關蛋白1輕鏈3-線粒體免疫熒光共定位分析METTL3/FOSL1 m6A軸和線粒體吞噬。

結果

10批QTXZG的高效液相色譜指紋圖譜鑒定出16個共有峰，將其分配給相應的草藥來源，并定量了5個代表性標記化合物。QTXZG改善了CGN小鼠的腎功能，抑制了系膜細胞增殖，同時降低了促炎細胞因子和活性氧水平，增強了超氧化物歧化酶活性。重要的是，QTXZG促進了自噬體的形成并減輕了線粒體損傷，增強了微管相關蛋白1輕鏈3-線粒體/電壓依賴性陰離子通道1的共定位，證實了線粒體吞噬誘導。從機制上講，QTXZG抑制了METTL3/FOSL1的表達，降低了整體m6A水平和FOSL1 mRNA m6A富集，并破壞了FOSL1轉錄本的穩定性。關鍵的是，METTL3過表達逆轉了QTXZG對脂多糖刺激的小鼠腎小球系膜細胞中炎癥、氧化應激、自噬和METTL3/FOSL1 m6A軸的影響。

結論

本研究表明，QTXZG通過調節METTL3/FOSL1 m6A軸誘導CGN腎小球系膜細胞的自噬。通過寫入酶METTL3靶向FOSL1 m6A修飾可能為CGN的治療提供一種潛在的治療方法。

圖文摘要

【前言】

慢性腎小球腎炎（CGN）是一種由免疫介導的炎癥驅動的進行性腎小球疾病，表現為蛋白尿、血尿和高血壓，通常進展為慢性腎病。雖然其發病機制尚不完全清楚，但免疫失調起著核心作用。目前的療法（糖皮質激素、免疫抑制劑、血管緊張素轉換酶抑制劑/血管緊張素受體阻滯劑）旨在減緩腎臟衰退，但面臨不良反應和療效可變的限制，通常導致終末期腎病。闡明CGN機制和開發靶向治療仍然是至關重要的研究重點。

芪藤消濁顆粒（QTXZG），一種標準化的草藥制劑，含有七種藥用成分——黃芪、益母草、益益仁、白花蛇舌草、白毛根、蟬蛻和雷公藤，通過其健脾、化瘀、排毒和改善腎臟參數的作用，在臨床實踐中對CGN管理進行了實證驗證。雖然其臨床療效有據可查，但其治療作用的分子基礎仍有待充分闡明。我們之前的蛋白質組學分析強調了線粒體吞噬是QTXZG腎臟保護作用的關鍵機制。隨后結合血清藥物化學和網絡藥理學的綜合分析確定，自噬和AMP激活的蛋白激酶/雷帕霉素機制靶點（AMPK/mTOR）信號通路是QTXZG生物活性成分的關鍵靶點。基于這些發現，我們假設QTXZG通過調節METTL3/FOSL1 m6A軸來增強腎小球系膜細胞的有絲分裂吞噬，從而抵消CGN的進展，從而發揮其治療作用。

為了驗證上述假設，本研究采用腺嘌呤誘導的CGN小鼠和脂多糖（LPS）刺激的小鼠腎小球系膜細胞（MGMCs）的體內和體外模型，研究QTXZG對METTL3/FOSL1 m6A軸以及MGMCs炎癥、氧化應激和自噬水平的影響。從RNA表觀遺傳學的角度，進行了功能和機制拯救實驗，以確定QTXZG治療CGN的治療機制。本研究旨在評估QTXZG作為一種治療慢性腎小球腎炎的多草藥植物制劑，并闡明其腎臟保護作用是否與通過METTL3/FOSL1 m6A軸的自噬激活有關。

【結果部分】

1.QTXZG 的化學表征與質量控制。

2.QTXZG 對 CGN 小鼠組織病理學及腎功能的治療作用。

3.含 QTXZG 血清對LPS刺激的MGMCs中炎癥反應及氧化應激的影響。

4.QTXZG 對 CGN 小鼠腎臟線粒體自噬的影響。

5.含 QTXZG血清對LPS刺激的MGMCs中線粒體自噬的影響。

6.QTXZG 在體內和體外均能調控METTL3/FOSL1的m6A修飾軸。

7.METTL3的過表達可逆轉LPS刺激的MGMCs中 QTXZG 介導的保護作用。

8.METTL3過表達可逆轉LPS刺激的MGMCs中 QTXZG 誘導的線粒體自噬。

9.METTL3過表達可逆轉LPS刺激的MGMCs中 QTXZG 介導的METTL3/FOSL1 m6A軸調控。

10.示意圖展示 QTXZG 在 CGN 中調控MGMCs內METTL3 / FOSL1 m6A線粒體自噬軸的作用機制。

【結論與討論】

本研究采用體內和體外模型相結合的綜合方法，闡明QTXZG通過METTL3/FOSL1 m6A自噬軸治療CGN的分子機制。我們的研究結果揭示了QTXZG緩解CGN的新機制，并表明靶向METTL3/FOSL1 m6A自噬軸可以為CGN提供新的治療策略。這些結果為QTXZG的臨床應用提供了關鍵證據，并開辟了一條新的途徑。

注：本文原創表明為原創編譯，非聲張版權，侵刪！

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