中藥單體靶標驗證-if17+: 廣州中醫藥大學團隊揭示中藥活性成分_漢黃芩素通過AMPK介導的TFEB激活緩解酒精性胰腺炎

【寫在前面】：本期推薦的是由廣州中醫藥大學藥學院國際轉化中醫研究所中醫證候國家重點實驗室廣東省實驗室（橫琴實驗室）、深圳兒童醫院藥學部、嶺南中藥資源教育部重點實驗室（廣州中醫藥大學）等研究團隊合作近期發表于Journal of Advanced Research(IF17.1）的一篇文章，揭示具有生物活性的黃酮類化合物_漢黃芩素通過AMPK介導的TFEB激活緩解酒精性胰腺炎。

【期刊簡介】

【題目及作者信息】

Wogonin, a bioactive flavonoid from Scutellaria baicalensis, alleviates alcoholic pancreatitis via AMPK-mediated TFEB activation

介紹

轉錄因子EB（TFEB）缺乏導致自噬降解不足，導致酶原顆粒（ZG）積聚和隨后過早激活，這是酒精性胰腺炎（AP）發病機制的基礎。盡管有這種機制上的見解，但通過植物衍生藥物對TFEB的藥理學激活仍然是一種不發達的治療途徑。

目的

本研究旨在探討漢黃芩素作為黃芩（黃芩，HQ）保護AP的關鍵成分的作用，特別關注TFEB介導的自噬激活。

方法

使用TFEB AcGFP和mRFP-GFP-LC3報告系統，我們評估了富含漢黃芩素的HQ提取物對TFEB核轉位和自噬通量的影響。結合藥理學和遺傳學方法，通過TFEB介導的自噬恢復，確定了HQ/漢黃芩素對酒精誘導的胰腺損傷的影響。采用基于結構的虛擬篩選和分子對接技術來預測漢黃芩素與調節TFEB的上游激酶的結合活性。通過表面等離子體共振（SPR）、等溫滴定量熱法（ITC）和細胞熱位移分析（CETSA）對優先相互作用進行了生物物理驗證。

結果

HQ/漢黃芩素增強TFEB核轉位和轉錄活性，從而恢復自噬降解，對酒精誘導的ZG積聚和胰腺損傷起到保護作用。Acinar TFEB敲除消除了HQ對AP的保護作用。機制研究表明，漢黃芩素直接與AMPK（AMP活化蛋白激酶）結合，促進其蛋白質穩定性，從而改善TFEB活化。

結論

本研究確定漢黃芩素是HQ治療功效背后的關鍵生物活性驅動因素，協調AMPK-TFEB自噬協調以減輕AP。漢黃芩素腺嘌呤模擬物與AMPK結合的原子水平分辨率為開發靶向TFEB激活的激酶穩定植物藥治療胰腺炎提供了新的治療策略。

圖文摘要

【前言】

胰腺炎是一種胰腺炎癥性疾病，由于其復雜的發病機制和有限的有效治療方法，仍然是一個重大的臨床挑戰。慢性飲酒是急性和慢性胰腺炎的一個有充分證據的危險因素，會導致病理改變，如消化酶水平升高、胰腺腺泡細胞中酶原顆粒（ZG）不穩定和酶過早激活。盡管酒精濫用普遍存在，但只有一小部分人會患上胰腺炎，這暗示了細胞內保護機制可以抵消酒精誘導的細胞應激。

TFEB的活性取決于其亞細胞定位，這主要取決于其磷酸化狀態。雷帕霉素復合物1（mTORC1）的機制靶標是研究最為深入的上游調節因子，它在絲氨酸122、142和211處磷酸化TFEB。據報道，能量感應中心腺苷一磷酸活化蛋白激酶（AMPK）可以磷酸化卵泡素相互作用蛋白1（FNIP1），從而破壞卵泡素-RagC-mTORC1對接，導致mTORC1抑制和隨后的TFEB核轉位和激活。此外，AMPK直接在絲氨酸466、467和469處磷酸化TFEB/TFE3，以增強其轉錄活性，特別是在應激或化療期間[8]。在雨蛙素誘導的AP期間，AMPK活性受到抑制。然而，AMPK抑制是否導致AP中TFEB的破壞尚不清楚。

黃芩（HQ）的干燥根是一種傳統的中草藥，在臨床前研究中已被證明具有抗炎作用。值得注意的是，HQ被廣泛納入中國經典的胰腺炎治療配方中，包括大柴胡、柴芩承氣湯。HQ的主要藥理活性成分包括漢黃芩素、黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、蘇木精A等。這些成分具有廣泛的藥理活性，包括抗炎、抗氧化、抗癌、抗病毒、抗菌、神經保護、心臟保護和肝臟保護作用。盡管其具有經驗性的治療用途，但HQ對胰腺炎保護作用的分子機制特征尚不清楚。

在這項研究中，我們發現富含漢黃芩素的HQ促進TFEB核轉位和轉錄活性，從而恢復自噬降解，并以TFEB依賴的方式對酒精誘導的胰腺炎提供保護。從機制上講，漢黃芩素直接與AMPK相互作用，增強其蛋白質穩定性，促進TFEB活化和自噬誘導。

【結果部分】

1.HQ在體外激活TFEB。

2.HQ在體外促進自噬。

3.HQ減輕小鼠酒精性胰腺損傷。

4.HQ恢復酒精性胰腺炎小鼠的TFEB活性。

5.TFEB過表達改善了酒精性胰腺炎的病理。

6.TFEB消融消除了HQ介導的酒精性胰腺炎保護作用。

7.HQ組分與TFEB上游激酶的分子對接分析。

8.漢黃芩素直接與AMPK相互作用以減輕酒精性胰腺炎病理。

9.漢黃芩素在體外激活TFEB。

10.漢黃芩素在體外促進自噬。

11.漢黃芩素通過AMPK-TFEB途徑治療酒精誘導的ZG積聚和胰腺炎的示意圖總結。

【結論與討論】

總之，我們的數據表明，漢黃芩素/HQ激活AMPK-TFEB通路以恢復自噬，這是預防酒精誘導的胰腺損傷的關鍵適應性機制。這些發現加深了我們對漢黃芩素治療胰腺炎的分子機制的理解，并為治療這種疾病的潛在治療方法提供了新的見解。

注：本文原創表明為原創編譯，非聲張版權，侵刪！

中醫藥基礎科研技術服務及加群交流：

相關咨詢，加微信：1278317307。

【福利時刻】科研服務（點擊查看）：、、、、、。咨詢加微信：1278317307。