疫苗前沿 | 神經母細胞瘤mRNA疫苗首次公開完整臨床前數據：腫瘤體積下降約70%

Introduction

前言

過去三年，mRNA腫瘤疫苗的主戰(zhàn)場集中在兩個方向：成人高突變負荷腫瘤（以黑色素瘤為代表）和個性化新抗原疫苗（以mRNA-4157/V940為代表）。KEYNOTE-942的陽性數據之后，這一賽道的臨床前景已經有了初步輪廓。

但另一類問題始終懸而未決：兒童實體瘤能不能走同一條路？

許多兒童實體瘤的突變負荷普遍低于成人，個性化新抗原策略的適用性受限。這意味著，如果要在兒童實體瘤中推進mRNA疫苗，策略重心可能需要轉向共享腫瘤相關抗原（TAA），而不是個體化新抗原；遞送平臺也未必需要延續(xù)LNP路線。

2026年6月發(fā)表于Molecular Therapy: Oncology的一項研究“mRNA vaccination using peptide nanoparticles triggers a strong immune response against endogenous GPC2 in a murine neuroblastoma model”，提供了這個方向上迄今首個公開發(fā)表完整臨床前數據的案例。研究團隊來自愛爾蘭RCSI醫(yī)科大學和英國貝爾法斯特女王大學，靶點是GPC2，遞送平臺是RALA肽納米顆粒，適應癥是神經母細胞瘤。

這不是臨床進展，是臨床前破冰。但它補上的，是兒童實體瘤mRNA疫苗從無到有的證據鏈起點。

為什么是GPC2？

靶點選擇是這類研究的第一道邏輯關卡。

GPC2（Glypican-2）是一種糖基磷脂酰肌醇錨定蛋白，屬于癌胚抗原，胚胎期廣泛表達，出生后在正常成體組織中表達極低，但在多種腫瘤中重新激活。研究者首先借助TCGA等公共數據庫的多癌種分析，顯示GPC2在多種腫瘤類型中呈現上調；隨后在神經母細胞瘤隊列中進一步分析（主要來自SEQC數據集，n=498）發(fā)現，GPC2高表達與無事件生存較差、INSS分期更晚、MYCN擴增狀態(tài)和高危分組均顯著相關。

在安全性先驗方面，GPC2成體正常組織表達極低，且既往GPC2靶向CAR-T已經進入臨床試驗（NCT05650749），既往臨床前研究顯示其具備較強抗腫瘤活性，并未觀察到明顯腫瘤外毒性。這為疫苗方向的開發(fā)提供了一定的安全性參照，但并不能直接替代疫苗本身的毒性評估。

從靶點覆蓋面看，GPC2還有一個值得關注的特征：約40%的神經母細胞瘤存在染色體7q22.1獲得，獨立于MYCN擴增狀態(tài)驅動GPC2上調。這意味著GPC2靶向策略的潛在覆蓋人群，不局限于MYCN擴增亞型。

RALA平臺：一個非LNP遞送路線的完整驗證

遞送平臺的選擇是本研究另一個值得單獨討論的維度。

RALA是一種由精氨酸（R）、丙氨酸（A）、亮氨酸（L）、丙氨酸（A）重復序列構成的兩親性陽離子細胞穿透肽。在生理pH（7.4）條件下，RALA與核酸自組裝形成納米顆粒，維持隨機卷曲構象；進入內體酸性環(huán)境后，RALA發(fā)生質子化，α螺旋度上升，促進內體逃逸并釋放mRNA進入細胞質。

本研究中，RALA/mGPC2在N:P=9配比下的關鍵理化參數為：平均粒徑99.07 nm，Zeta電位+26.43 mV，PDI 0.288，封裝效率超過94%（經RiboGreen熒光法、瓊脂糖凝膠電泳和離子交換色譜三種方法交叉驗證）。與商業(yè)化脂質轉染試劑Lipofectamine 3000相比，48小時DC2.4細胞活力約90%對約20%，細胞毒性差異顯著。

凍干實驗方面，凍干后顆粒粒徑減小、Zeta電位升高、PDI改善，關鍵理化參數仍處于預設質量標準范圍內，提示其在制劑穩(wěn)定性上具有進一步開發(fā)價值。但長期穩(wěn)定性數據和規(guī)模化放大工藝的系統(tǒng)評估，尚未在本研究中呈現，還需后續(xù)數據支撐。

與LNP相比，RALA平臺有幾個已發(fā)表數據支持的特點：不誘導針對載體本身的免疫反應（避免抗載體抗體干擾重復給藥）、對cargo大小和數量限制相對寬松、合成和純化工藝相對簡單。這些特點在腫瘤疫苗多次給藥場景下具有一定設計優(yōu)勢，但其與LNP的系統(tǒng)性頭對頭比較數據目前并不存在，需要審慎解讀。

先證明疫苗“能工作”：表達、定位與細胞毒性

功能驗證在DC2.4樹突狀細胞系和HEK293細胞系中同步進行。

Western blot顯示，RALA/mGPC2轉染后24小時可檢測到GPC2蛋白表達，72小時回落至基線——瞬時表達動力學符合mRNA疫苗的設計預期，有助于在抗原呈遞窗口后避免慢性刺激誘導的T細胞耗竭風險。

亞細胞分級分離實驗確認，GPC2蛋白特異性定位于膜組分，細胞質和核組分均未檢出，與GPC2作為GPI錨定蛋白的天然生物學行為一致。這支持翻譯產物經正常分泌通路加工并錨定于細胞表面，為MHC-I類分子抗原呈遞提供了物質基礎。

免疫反應是否足夠清晰：GPC2特異性T細胞被激活

C57BL/6小鼠（Th1型細胞免疫主導品系，適合評估CTL反應為核心的腫瘤疫苗）經靜脈注射接受三劑RALA/mGPC2（20 μg/次），末次免疫后21天取脾，以GPC2重疊肽庫體外再刺激，ELISpot評估細胞因子分泌。

結果顯示，RALA/mGPC2組的抗原特異性IFN-γ（107.1 SFU/250,000細胞，p<0.0001）和IL-2（100.6 SFU/250,000細胞，p<0.001）均顯著高于陽性對照mRNA疫苗組和重組GPC2蛋白免疫組。胞內細胞因子染色顯示CD4?和CD8? T細胞TNF-α表達趨勢升高。

記憶T細胞亞群方面，RALA/mGPC2免疫組CD4? TEM（33.48%，p=0.002）、CD4? TCM（2.11%，p=0.015）、CD8? TEM（50.52%，p=0.015）、CD8? TCM（10.61%，p=0.015）均顯著高于對照。這提示疫苗不僅誘導了一次性炎癥反應，而是可能推動了具有再激活潛力的T細胞狀態(tài)；但其能否真正轉化為復發(fā)控制，還需要更長期、更貼近臨床場景的模型驗證，本研究未設計長期免疫保護或復發(fā)挑戰(zhàn)實驗。

給藥途徑比較方面，靜脈注射較皮內注射的IFN-γ和IL-2誘導效能約高3倍，提示全身性抗原分發(fā)至脾臟和淋巴結的重要性，但最優(yōu)給藥方案在臨床轉化中仍需進一步探索。

小鼠模型里的治療信號：腫瘤延遲出現，體積下降約70%

皮下植入9464D細胞（MYCN擴增型神經母細胞瘤，C57BL/6背景），腫瘤植入后第11、15、18天靜脈注射RALA/mGPC2，監(jiān)測至第60天。

對照組中位腫瘤體積408.45 mm3，免疫組132.3 mm3，腫瘤體積差異約70%；可觸及腫瘤出現時間延遲10-11天；免疫組生存率更高。血清毒性生物標志物（肌酸激酶、肌酐、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶）均在C57BL/6正常參考范圍內。

幾處需要說清楚的局限：疫苗編碼人源GPC2，研究者通過BLAST比對確認人鼠GPC2序列高度同源并共享MHC預測表位，支撐了跨物種免疫應答邏輯，但人類患者GPC2表位譜的直接驗證仍需獨立數據。神經母細胞瘤MHC-I表達在高危病例中常見下調或缺失，主要由表觀遺傳機制介導，作者提出與HDAC抑制劑聯合使用作為下一步策略，但目前尚無實驗數據支持。此外，本研究為單一腫瘤模型、單一給藥方案，免疫方案優(yōu)化和聯合治療策略均待后續(xù)研究。

從臨床前概念驗證到患者獲益，還有幾道關口

有幾個維度值得在行業(yè)語境下定位。

遞送平臺多元化的新數據點。 當前mRNA腫瘤疫苗臨床管線高度依賴LNP，RALA作為肽納米顆粒平臺在已發(fā)表數據中積累了DNA/RNA多種cargo的遞送經驗，本研究是其在腫瘤mRNA疫苗方向的一次完整臨床前驗證。它與LNP的系統(tǒng)性對比，將是后續(xù)研究的自然問題。

共享TAA策略在兒童腫瘤中的潛力。 GPC2作為在多種兒童和成人腫瘤中高表達的共享抗原，如果疫苗策略成立，其潛在適應癥范圍遠超神經母細胞瘤單一適應癥。研究者也在文中指出這一點，作為后續(xù)擴展的依據。

與CAR-T的平臺協(xié)同問題。 GPC2靶向CAR-T已在臨床，GPC2疫苗與CAR-T在同一靶點上形成的免疫組合，在理論上有互補潛力，但兩者的相互作用（包括抗原逃逸、免疫環(huán)境重塑等）需要明確的實驗設計來評估，而非直接假設協(xié)同。

結語

這項研究真正的價值，不在于宣告一個新的治療選項，而在于它為兒童實體瘤mRNA疫苗的臨床前研究提供了一個可參照的完整證據框架：靶點選擇邏輯、非LNP遞送平臺驗證、免疫原性評估策略，以及腫瘤控制數據的解讀邊界。

mRNA腫瘤疫苗正在從成人高突變腫瘤、個性化新抗原路線，向兒童實體瘤、共享腫瘤相關抗原和非LNP遞送平臺方向拓展。這項研究是這個擴展方向上，目前公開文獻中證據鏈最完整的臨床前案例之一。

它是臨床前破冰，不是終點。

參考資料

King E, et al. mRNA vaccination using peptide nanoparticles triggers a strong immune response against endogenous GPC2 in a murine neuroblastoma model. Molecular Therapy: Oncology. Vol.34, June 2026.

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來源| RNAScript

校稿| Alice編審| Hide / Blue sea

編輯 設計| Leon