Nat Commun 丨中大醫(yī)院腎科專家團隊最新研究成果發(fā)表

4月29日，東南大學附屬中大醫(yī)院腎臟內科王彬教授、張曉良教授和劉必成教授團隊的研究成果“Uromodulin p.His36Tyr promotes macrophage pyroptosis via App-Cd74 signaling to drive renal inflammation in ADTKD”在國際權威期刊Nature Communications雜志發(fā)表。該研究系統(tǒng)揭示了Umod突變腎小管上皮細胞通過App-Cd74分子通訊誘導巨噬細胞焦亡，從而推動ADTKD-Umod腎間質炎癥和纖維化進展的關鍵機制。東南大學附屬中大醫(yī)院腎臟內科王彬教授、張曉良教授和劉必成教授為論文的共同通訊作者，伍倩倩博士、彭思琪博士后和張奕琳博士后為共同第一作者。該研究獲得國家自然科學基金重大研究計劃、國家自然科學基金面上項目及江蘇省重點研發(fā)計劃社會發(fā)展項目資助。

常染色體顯性小管間質性腎病UMOD相關型（autosomal dominant tubulointerstitial kidney disease caused by UMOD mutations，ADTKD-UMOD）是一類由UMOD基因突變引起的單基因遺傳性腎臟病，主要表現為進行性腎功能下降、腎間質炎癥浸潤和纖維化，并最終可進展至終末期腎病。小管間質炎癥是ADTKD-UMOD腎臟損傷持續(xù)進展的重要環(huán)節(jié)，然而免疫炎癥如何被激活，以及UMOD突變腎小管細胞如何參與這一過程并不清楚。

該研究首先從臨床一個ADTKD家系開始，通過全外顯子測序及Sanger測序驗證，研究團隊發(fā)現該家系多名受累成員均攜帶同一UMOD基因雜合錯義變異c.106C>T（p.His36Tyr）。結合家系共分離特征、致病性預測及保守性分析，依據 ACMG 標準，該變異被判定為可能致病變異（圖1）。

圖1 UMOD p.His36Tyr突變ADTKD家系的發(fā)現

為進一步解析UMOD p.His36Tyr突變的致病機制，研究團隊構建了Umod H36Y/+點突變小鼠模型，該模型表現出腎功能下降、腎囊腫、腎間質炎癥、纖維化及突變Umod蛋白異常蓄積等ADTKD-UMOD典型特征?；谠撃Ｐ停芯繄F隊整合單細胞轉錄組和空間轉錄組分析發(fā)現，突變小鼠腎臟中巨噬細胞顯著增多，并伴隨炎癥活化和焦亡信號增強，且這些異常信號主要聚集于病變腎小管周圍。進一步體內驗證顯示，GSDMD-N、NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18等焦亡相關標志物在突變腎組織中明顯升高，并主要定位于F4/80陽性巨噬細胞（圖2）。

圖2 ADTKD-UMOD腎臟巨噬細胞焦亡激活

為了明確巨噬細胞及其焦亡表型在疾病進展中的功能意義，研究團隊首先采用氯膦酸脂質體清除Umod H36Y/+小鼠腎臟巨噬細胞。結果顯示，巨噬細胞清除后，腎組織中促炎因子和焦亡相關蛋白明顯下降。進一步地，研究團隊使用經典焦亡抑制劑Disulfiram（DSF）對Umod H36Y/+小鼠進行干預。經過8周治療，尤其在高劑量DSF組中，小鼠腎功能指標得到改善，腎間質炎癥和纖維化減輕。這提示巨噬細胞焦亡是推動腎間質損傷和纖維化進展的重要效應制（圖3）。

圖3 抑制巨噬細胞焦亡可減輕Umod H36Y/+小鼠腎臟損傷

該研究發(fā)現，突變mDCT細胞的條件培養(yǎng)基并不能有效誘導巨噬細胞焦亡，而只有在突變mDCT細胞與巨噬細胞直接共培養(yǎng)時，巨噬細胞才出現明顯的焦亡表型。提示該過程并非主要由可溶性分泌因子介導，而可能依賴細胞間直接接觸及配體-受體互作?；谶@一線索，研究團隊開展細胞通訊分析，發(fā)現Umod H36Y/+小鼠腎臟中突變腎小管細胞與巨噬細胞之間的通訊顯著增強，其中App-Cd74軸尤為突出。App主要在突變腎小管上皮細胞中上調，而Cd74主要富集于巨噬細胞。進一步的空間轉錄組和組織驗證也顯示，App陽性腎小管周圍可見Cd74陽性巨噬細胞聚集，支持二者在病變區(qū)域存在密切互作（圖4）。進一步的體外功能實驗表明，阻斷App-Cd74互作或降低App/Cd74表達，可明顯減弱巨噬細胞NF-κB信號激活和焦亡反應。上述結果表明，App-Cd74軸介導的異常小管-巨噬細胞通訊，是Umod突變腎小管細胞驅動巨噬細胞焦亡和腎間質炎癥放大的關鍵機制。

圖4 App-Cd74軸介導突變腎小管細胞與巨噬細胞之間的異常通訊

在明確App-Cd74軸在突變腎小管細胞誘導巨噬細胞焦亡中的關鍵作用后，研究團隊進一步評估了靶向該通路的體內干預潛力。研究采用App轉錄后調節(jié)劑ARN2966對Umod H36Y/+小鼠進行連續(xù)8周治療。結果顯示，ARN2966不僅降低了突變小鼠腎小管上皮細胞中App的表達，也同步下調了腎組織中焦亡相關因子水平，并顯著減輕腎間質炎癥細胞浸潤和纖維化程度，改善腎功能損傷（圖5）。上述結果提示，靶向App-Cd74介導的異常小管-巨噬細胞通訊，可有效抑制巨噬細胞焦亡及其引發(fā)的炎癥放大反應，為ADTKD-UMOD的機制導向治療提供了新的潛在策略。

圖5 ARN2966改善Umod H36Y/+小鼠腎間質炎癥和腎功能損傷

該研究從一個ADTKD家系出發(fā)，鑒定并驗證了新的UMOD致病變異p.His36Tyr。通過多組學解析及體內外功能實驗，系統(tǒng)揭示了ADTKD-UMOD中突變腎小管細胞驅動腎間質炎癥的新機制：Umod突變誘導腎小管上皮細胞App異常上調，并通過App-Cd74軸與巨噬細胞發(fā)生異常通訊，驅動巨噬細胞焦亡，最終推動腎間質炎癥、纖維化及腎功能損傷進展。該研究將ADTKD-UMOD的機制認識從既往關注“突變UMOD蛋白異常蓄積”進一步延伸至“突變腎小管細胞調控間質免疫炎癥”這一層面，明確了巨噬細胞焦亡在疾病進展中的重要作用，并提出App-Cd74軸可作為潛在干預靶點，深化了對ADTKD-UMOD炎癥進展機制的理解。（編輯 崔玉艷 校對 劉敏 編審 程守勤）